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當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心蛋白相關(guān)服務(wù)重組蛋白制備哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)
1. 能實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性;
2. 表達(dá)水平高;
3. 高效啟動(dòng)子控制蛋白表達(dá)
4. 適合大規(guī)模蛋白表達(dá)。

產(chǎn)品型號(hào):
更新時(shí)間:2020-08-27
廠商性質(zhì):代理商
訪問(wèn)量:2501

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哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)

1. 能實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性;

2. 表達(dá)水平高;

3. 高效啟動(dòng)子控制蛋白表達(dá)

4. 適合大規(guī)模蛋白表達(dá)。

艾伯森生物哺乳表達(dá)系統(tǒng)

艾伯森生物提供表達(dá)載體構(gòu)建、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、表達(dá)測(cè)試及大規(guī)模動(dòng)物細(xì)胞發(fā)酵和蛋白純化等一站式蛋白技術(shù)服務(wù)。

 

表達(dá)載體:pcDNA 3.1,pIRES,pTT3,pCEP4,pATX1等常規(guī)載體以及我司分子技術(shù)人員自行合成與后期改造的性載體。

艾伯森生物哺乳表達(dá)系統(tǒng)服務(wù)內(nèi)容

1. 載體構(gòu)建及改進(jìn)

 1) 可將cDNA克隆至客戶或艾伯森生物提供的哺乳細(xì)胞的表達(dá)載體中;

 2) 可在表達(dá)載體中添加分泌信號(hào)肽和純化標(biāo)簽,促進(jìn)蛋白分泌表達(dá)及滿足一步親和純化的需求;

 3) 能生產(chǎn)并鑒定高效穩(wěn)定細(xì)胞系,適合大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)。

2. 穩(wěn)定基因表達(dá)符合長(zhǎng)期生存需求。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作流程提供長(zhǎng)期穩(wěn)定及規(guī)模可調(diào)的蛋白生產(chǎn)

3. 瞬時(shí)表達(dá)(TGE)

 1) 與穩(wěn)定基因表達(dá)相比,TGE主要適用于短期內(nèi)制備重組蛋白,一般在10天內(nèi)即可快速轉(zhuǎn)染,無(wú)需質(zhì)粒DNA的遺傳性選擇

 2) 艾柏森生物的瞬時(shí)表達(dá)使用懸浮細(xì)胞,能夠完成體積到100L的蛋白表達(dá)。

4. 工藝過(guò)程開(kāi)發(fā)及擴(kuò)大規(guī)模。艾柏森生物能夠優(yōu)化表達(dá)過(guò)程以及表達(dá)產(chǎn)物,檢測(cè)細(xì)胞表達(dá)量,摸索發(fā)酵罐發(fā)酵條件,適合大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)。

5. 純化。艾伯森生物擁有完整的蛋白純化系統(tǒng),親和純化,凝膠過(guò)濾,離子交換及疏水層析等純化方法,能夠完成帶標(biāo)簽與不帶標(biāo)簽蛋白的純化,以及純化工藝的摸索。

服務(wù)流程

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Mamalian Cells

 

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Mamalian Cells

經(jīng)典案例

某生物細(xì)胞器基質(zhì)蛋白,全長(zhǎng)334aa,大小37.03kDa,自帶Fc標(biāo)簽蛋白,采用293F細(xì)胞表達(dá)。我們?cè)趯?duì)其編碼基因進(jìn)行全密碼子優(yōu)化后,把它構(gòu)建到pTT3載體上,測(cè)序驗(yàn)證無(wú)誤后,進(jìn)行了30ml體積試表達(dá),如Figure1:

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining.

MW. Molecular weight marker.Ø. Non-transfected (negative control).

目的蛋白的大回收率,我們先后對(duì)Flowthrough進(jìn)行了兩次Protein G純化(Figure2~Figure3),可以看到在第二次純化后,F(xiàn)T中尚殘留的目的蛋白。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Mamalian Cells

Figure2. Target protein purification profile.

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis.

為此我們提高了鹽濃度至300mMNaCl,這次洗脫后,F(xiàn)T中剩余的蛋白量顯著降低,如Figure4.

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis.

再是表達(dá)摸索清楚成熟的實(shí)驗(yàn)條件后,我們進(jìn)入大體積制備,2L發(fā)酵。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 6. Target protein purification profile and QC gel.

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