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酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)

產(chǎn)品簡介

畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)介紹

畢赤酵母(Pichia pastoris)表達(dá)系統(tǒng)是近年來發(fā)展迅速、應(yīng)用廣泛的一種真核表達(dá)系統(tǒng)。它是甲醇營養(yǎng)型酵母菌,有兩個乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX)編碼基因AOX1和AOX2,兩種序列相似,AOX1基因嚴(yán)格受甲醇誘導(dǎo)和調(diào)控。當(dāng)甲醇為碳源時,AOX1啟動子可被甲醇誘導(dǎo),啟動乙醇氧化酶的表達(dá),從而用甲醇進(jìn)行代謝,含AOX1啟動子的質(zhì)粒可用來促進(jìn)

產(chǎn)品型號:
更新時間:2020-05-22
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酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)介紹

畢赤酵母(Pichia pastoris)表達(dá)系統(tǒng)是近年來發(fā)展迅速、應(yīng)用廣泛的一種真核表達(dá)系統(tǒng)。它是甲醇營養(yǎng)型酵母菌,有兩個乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX)編碼基因AOX1和AOX2,兩種序列相似,AOX1基因嚴(yán)格受甲醇誘導(dǎo)和調(diào)控。當(dāng)甲醇為碳源時,AOX1啟動子可被甲醇誘導(dǎo),啟動乙醇氧化酶的表達(dá),從而用甲醇進(jìn)行代謝,含AOX1啟動子的質(zhì)粒可用來促進(jìn)編碼外源蛋白的目的基因的表達(dá)。

表達(dá)菌株特點

GS115:AOX1和AOX2基因都正常表達(dá)AOX蛋白(乙醇氧化酶),甲醇的利用率高,接近于野生型,屬于甲醇快速利用型(Mut+)

KM71:AOX1基因被大部分剔除,只能利用AOX2為AOX編碼,甲醇的利用速率變慢,表現(xiàn)為甲醇慢利用型(Muts)

外源基因的整合方式不同會導(dǎo)致表達(dá)菌株的表型不同:

菌株表型

酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)常用表達(dá)載體及篩選標(biāo)記

載體信息

 

信號肽

對于胞外表達(dá)的蛋白除了可以用載體自帶的信號肽,還有以下信號肽可供選擇:

信號肽序列

畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢

1. 含有*的強(qiáng)有力的AOX(醇氧化酶基因)啟動子,用甲醇可嚴(yán)格地調(diào)控外源基因的表達(dá)。

2. 培養(yǎng)成本低,產(chǎn)物易分離,畢赤酵母所用發(fā)酵培養(yǎng)基成本合理,一般碳源為甘油或葡萄糖及甲醇,其余為無機(jī)鹽,培養(yǎng)基中不含蛋白,有利于下游產(chǎn)品分離純化。

3. 外源蛋白基因遺傳穩(wěn)定,外源基因能以高拷貝數(shù)整合到畢赤酵母基因組中,不易丟失并能得到高表達(dá)菌株。

4. 作為真核表達(dá)系統(tǒng),畢赤酵母具有真核生物的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能。

艾柏森生物酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢

1. 具備完備的畢赤酵母表達(dá)平臺,可以根據(jù)蛋白特性或客戶的需求設(shè)計不同的實驗方案;

2. 具有高通量的篩選平臺,可以快速有效的得到好的表達(dá)條件;

3. 具有大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)能力

服務(wù)組合

酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Yeast

經(jīng)典案例

表達(dá)載體pPIC3.5K(胞內(nèi)表達(dá)),目的蛋白32.49KD(理論值)

表達(dá)菌株:GS115/KM71

誘導(dǎo)條件:甲醇濃度0.5%/1%,誘導(dǎo)時間24h/48/72h

結(jié)果分析:從SDS-PAGE膠圖中可以看到,目的蛋白(糖基化后40KDa左右)有明顯表達(dá),其中GS115-5#-24h,0.5%甲醇,GS115-2#-48h,1%甲醇,GS115-3#-48h,01%甲醇,KM71-1#-72h,1%甲醇,都有很明顯的目的條帶,目的蛋白成功表達(dá)。

 

酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Yeast

 

酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Yeast

 

 

酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng);Protein Expression in Yeast

 

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