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重組蛋白的表達包含哪些技術——艾柏森生物

更新時間:2024-08-29點擊次數:965

重組蛋白的表達技術涵蓋了從基因克隆到蛋白純化等多個環節,主要包括以下幾類技術:

 

基因克隆與載體構建:在這一步驟中,目標蛋白的基因序列被克隆到合適的表達載體中,這些載體通常包含有抗生素抗性基因、啟動子、以及用于蛋白純化的標簽序列等。例如,可以使用pET系列載體在大腸桿菌中表達目標蛋白 。

 

原核表達系統:原核表達系統,如大腸桿菌(Escherichia coli),是常見的表達系統。它基于T7 RNA聚合酶及其強啟動子之間的特異性和轉錄的高效性建立的pET系統是

常用的E. coli表達系統 。

 

真核表達系統:包括酵母、昆蟲/桿狀病毒以及哺乳動物細胞表達系統。這些系統能夠提供更接近天然狀態的蛋白,包括正確的折疊和翻譯后修飾 。

 

密碼子優化:根據表達系統對密碼子的偏好性進行優化,提高mRNA二級結構的穩定性和新生肽段的正確折疊,從而提高外源活性蛋白的表達 。

 

表達條件優化:包括培養溫度、培養基組成、誘導條件等,這些因素都會影響蛋白的可溶性和表達量

 

蛋白純化技術:利用親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析等技術對表達的蛋白進行純化,以獲得高純度的重組蛋白

 

質量控制:對純化后的蛋白進行生物活性檢測、純度分析和內毒素水平檢測等,確保蛋白的質量和安全性

 

規模放大:在實驗室條件下成功表達和純化蛋白后,需要將生產過程放大到工業規模,以滿足商業化的需求

 

分子伴侶或折疊酶共表達:通過共表達分子伴侶或折疊酶幫助目標蛋白正確折疊,增加可溶性蛋白的表達量

 

細胞自由表達系統:這是一種在無細胞體系中進行蛋白表達的方法,可用于快速生產蛋白,特別是難以在細胞內表達的膜蛋白或毒素蛋白

 

這些技術的選擇和應用取決于目標蛋白的特性、所需的蛋白量、以及是否需要特定的翻譯后修飾等因素。通過這些技術的組合使用,可以實現高效、高產量的重組蛋白生產。


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