国产精品123-国产精品12-国产精品1024在线永久免费-国产精品1024永久免费视频-中文字幕一区二区三区精彩视频-中文字幕一区二区三区 精品

010-56256916

技術文章

TECHNICAL ARTICLES

當前位置:首頁技術文章噬菌體展示系列之抗體親和力成熟

噬菌體展示系列之抗體親和力成熟

更新時間:2021-08-27點擊次數:1626

近年來,隨著抗體藥物的廣泛上市,抗體已經取代基因治療成為生物制藥領域的主要生力軍。而抗體在疾病診斷、治療和預防方面的作用很大程度上取決于其親和力的高低,隨著抗體工程技術的不斷發展,如何提高抗體親和力已成為抗體工程的難題之一。圍繞這一問題人們已經從不同的角度展開了研究,例如,提高抗體庫的質量、增加抗體庫的多樣性、進行抗體重鏈或輕鏈的替換以及點突變有目的進行氨基酸替換等都能不同程度地提高抗體親和力。

 

抗體親和力表示抗體與抗原結合能力的大小。抗體親和力成熟是指機體正常存在的一種免疫功能狀態。在體液免疫中,再次應答所產生抗體的平均親和力高于初次免疫應答,這種現象稱為抗體親和力成熟。

 

噬菌體展示技術作為一種*的抗體庫構建技術能結合多種技術手段,于體外實現抗體的親和成熟,并配合親和篩選方法獲得具有高親和力的抗體。在噬菌體抗體展示技術中,VH和VL基因的隨機重組,在一定程度上模擬了體內抗體親和力成熟的過程。如果結合其它技術則可以使抗體的親和力提高到一個更高的層次,下面介紹一些抗體親和力成熟的方法。

 

體外抗體親和力成熟的幾種策略
要想實現抗體的親和力體外成熟,就必須充分地了解天然抗體的親和力體內成熟原理,設計模擬體內可能出現和存在的變化,從而促進抗體的體外進化。天然抗體的親和力成熟可以分為體細胞高頻突變和克隆選擇兩個過程。在天然抗體親和力成熟的過程中,抗原刺激下的體細胞高頻突變有著舉足輕重的作用,因此親和力體外成熟的策略也多在抗體基因突變水平上,即采用各種突變方法來模擬體內的高頻突變。

1.隨機突變

(1)錯配PCR
通過改變PCR反應條件,提高核酸錯配率將隨機突變引入基因序列。該技術可以通過提高鎂離子濃度、加入錳離子、失衡4種脫氧核苷三磷酸(dNTPs) 濃度、使用低保真DNA聚合酶等方法,來提高抗體基因的突變率。除此之外,突變率的高低也可以采用改變模板DNA的復制次數進行控制。復制次數越多,突變率將累積得越高。理論上經過多輪的PCR反應可獲得0.15%~3%的突變頻率,再用突變的抗體基因庫建立噬菌體抗體庫,最后從中篩選高親和力抗體。噬菌體展示技術有效的改善了使用錯配PCR技術導致的抗體親和性和特異性的喪失,以及有效突變體過少的問題。
(2) DNA改組
DNA改組技術是對同源的抗體基因,采用脫氧核糖核酸酶I將其切割成不超過50bp的.片段,再隨機組合后進行PCR擴增成完整的抗體基因。它包含了抗體片段隨機化切割、重組和篩選的過程,一定程度上模擬了天然抗體的親和力成熟過程,并加快了體外定向進化速度。采用連續多輪的DNA改組具有去除有害突變優勢。另外,DNA改組獲得的突變體,突變位點可以位于非抗原直接接觸的區域,有擴大庫容的作用。

(3)鏈改組.
鏈改組即鏈替換技術,是固定抗體的一條輕鏈或重鏈不變,而將另一條重鏈或輕鏈經過突變處理后,重新與固定鏈配對,以提高抗體親和力的方法。該方法保留一 條鏈不變,目的是為了保持抗體的特異性,而將經過突變處理的另一條鏈與其配對,是為了增加抗體的親和力,以篩選到更高親和力的抗體,重復進行鏈替換和親和力篩選將產生更高親和力的抗體。

 



將噬菌體展示技術與此技術結合構建次級抗體庫將使該法更便利。鏈改組技術能有效提高抗體親和力,但如果無法明確了解zhiding抗原的基因結構,或者抗體基因片段未能擁有一 個比較完整的初級抗體庫,則不適合使用鏈改組技術。

 

 

(4)突變株
EscherichiacoliMutD5是zui常用的大腸埃希菌突變株,該菌株可以校對和復制后錯配修復缺陷,產生高頻率的單個堿基替換,突變率高于普通菌株105 倍。突變株法的優勢是突變發生在轉化宿主菌后,而其他方法的突變均發生于轉化之前,而轉化效率是限制大容量突變庫構建的關鍵因素之一。使用突變株法可以構建庫容為1012_ 104 個克隆的超大容量抗體庫,利用噬菌體展示技術篩選高親和抗體,通過該法的可以獲得一些未能在定向突變中獲得的突

 

艾柏森生物提供抗體親和力檢測服務如下

非標記(Label-free) 交互分析是科學家用于研究生物分子之間相互作用的重要方法,艾柏森生物研究團隊可運用*的Biacore、ProteOn和octet系統對抗體的親和力和動力學進行測量。 這些系統主要基于光學效應的技術-表面等離子體共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)和生物膜層表面干涉技術(bio- layer interferometry, BLI),可直接檢測分子間相互作用并進行實時監測。親和力動態測定方法表面等離子共振法(SPR) 是一種生物大分子相互作用分析(biomolecularinteraction analysis, BIA)技術,這種技術基于表面等離子共振的物理光學現象的生物傳感分析技術,不必使用熒光標記或同位素標記,從而讓保持了生物分子的天然活性,且可實時檢測抗原抗體等生物大分子相互作用的全過程。

 

 

SPR光譜可以實時監測傳感芯片表面液相折射率的變化,而這一變化和傳感芯片 表面所結合的生物分子的質量成正比,共振單位(Response unit, RU)相對時間來表示。因此,通過分析反應過程中各時刻的SPR光譜,可在非標記的情況下監測生物分子間的相互作用。
SPR技術特點:
●Lable-Free技術, 無需利熒光素同位素等分子檢測
Real-Time技術,可直接、實時監測相互作用的全過程
●獲得分子相互作用的親和力及熱動力學信息
●光路不經過樣品,不受樣品顏色影響
●樣品消耗低,自動化程度高
結果交付:
●和力報告(定量分析) :結合常數(Ka) 、解離常數(Kd)和親和常數(Kp)
●電好圖片&完整實驗報告,包括實驗步驟、使用試劑、儀器、軟件檢索參數等


熱線電話:010-56256916

關注公眾號

Copyright © 2025 安諾倫(北京)生物科技有限公司 版權所有    備案號:京ICP備16059737號-3

技術支持:化工儀器網    管理登錄    sitemap.xml

欧美激情影院| 麻豆系列 在线视频| 成人免费观看网欧美片| 欧美a级片视频| 国产一区二区精品| 欧美激情在线精品video| 91麻豆国产福利精品| 欧美一区二区三区在线观看| 国产不卡精品一区二区三区| 亚洲精品久久玖玖玖玖| 日韩在线观看视频黄| 欧美激情伊人| 国产高清视频免费观看| 日韩avdvd| a级毛片免费全部播放| 国产网站免费在线观看| 九九久久国产精品大片| 国产麻豆精品高清在线播放| 欧美日本免费| 国产高清视频免费观看| 成人影视在线播放| 台湾美女古装一级毛片| 国产一区免费观看| 你懂的福利视频| 香蕉视频久久| 亚州视频一区二区| 欧美夜夜骑 青草视频在线观看完整版 久久精品99无色码中文字幕 欧美日韩一区二区在线观看视频 欧美中文字幕在线视频 www.99精品 香蕉视频久久 | 欧美另类videosbestsex视频| 国产激情视频在线观看| 国产麻豆精品免费视频| 99久久精品国产国产毛片| 国产美女在线一区二区三区| 国产视频网站在线观看| 日韩中文字幕在线亚洲一区| 韩国三级香港三级日本三级| 欧美激情伊人| 日韩中文字幕在线播放| 久久久久久久男人的天堂| 亚洲精品影院| 国产网站在线| 欧美国产日韩精品| 国产不卡在线观看视频| 久久国产影院| 欧美一级视| 欧美a级片免费看| 久久99中文字幕久久| 青青久久精品| 国产一区二区精品久| 国产视频一区二区三区四区| 久草免费在线视频| 欧美另类videosbestsex久久| 久久福利影视| 一级毛片视频在线观看| 久久久久久久免费视频| 91麻豆爱豆果冻天美星空| 日本久久久久久久 97久久精品一区二区三区 狠狠色噜噜狠狠狠狠97 日日干综合 五月天婷婷在线观看高清 九色福利视频 | 欧美大片一区| 日本免费乱人伦在线观看 | 久草免费资源| 99久久精品费精品国产一区二区| 一本高清在线| 精品国产一区二区三区久久久蜜臀 | 日本特黄一级| 日本特黄特黄aaaaa大片| 国产麻豆精品高清在线播放| 久久国产一久久高清| 一级毛片看真人在线视频| 国产一区二区精品| 国产原创中文字幕| 精品视频在线观看免费| 99久久精品国产麻豆| 韩国三级视频网站| 青青青草视频在线观看| 欧美另类videosbestsex视频| 黄视频网站在线观看| 欧美夜夜骑 青草视频在线观看完整版 久久精品99无色码中文字幕 欧美日韩一区二区在线观看视频 欧美中文字幕在线视频 www.99精品 香蕉视频久久 | 日本久久久久久久 97久久精品一区二区三区 狠狠色噜噜狠狠狠狠97 日日干综合 五月天婷婷在线观看高清 九色福利视频 | 日本久久久久久久 97久久精品一区二区三区 狠狠色噜噜狠狠狠狠97 日日干综合 五月天婷婷在线观看高清 九色福利视频 | 国产麻豆精品免费视频| 一级毛片视频免费| 午夜激情视频在线观看| 日韩免费在线| 国产高清在线精品一区二区| 亚洲女人国产香蕉久久精品| 国产国语在线播放视频| 日韩免费片| 999精品视频在线| 国产一区二区精品久久91| 亚洲精品久久玖玖玖玖| 日韩免费在线视频| 午夜在线影院| 国产a一级| 欧美另类videosbestsex视频 | 精品在线免费播放| 青青久久精品国产免费看| 国产韩国精品一区二区三区| 日本乱中文字幕系列| 欧美国产日韩精品| 欧美激情一区二区三区视频 | 成人a大片高清在线观看| 天天做人人爱夜夜爽2020毛片| 欧美a级片视频| 99热热久久| 精品视频在线看 | 国产激情一区二区三区| 日韩中文字幕一区二区不卡| 欧美大片一区| 欧美一级视频免费| 久久成人性色生活片| 精品国产一区二区三区久久久蜜臀 | 天天做人人爱夜夜爽2020| 好男人天堂网 久久精品国产这里是免费 国产精品成人一区二区 男人天堂网2021 男人的天堂在线观看 丁香六月综合激情 | 成人影院一区二区三区| 国产高清在线精品一区二区| 天天色成人网| 久久久成人网| 99久久精品费精品国产一区二区| 亚洲第一视频在线播放| 日韩av成人| 亚洲精品久久玖玖玖玖| 高清一级做a爱过程不卡视频| 日本在线不卡视频| 高清一级片| 香蕉视频久久| 国产a视频| 久久国产影院| 精品视频一区二区| 九九久久99| 青青久热| 国产成人欧美一区二区三区的| 韩国毛片免费| 国产成人精品一区二区视频| 黄视频网站免费看| 可以在线看黄的网站| 欧美大片a一级毛片视频| 国产网站麻豆精品视频| 欧美a级成人淫片免费看| 欧美a免费| 精品国产三级a| 黄视频网站免费| 999精品视频在线| 精品在线观看一区| 欧美大片一区| 高清一级做a爱过程不卡视频| 成人免费网站视频ww| 欧美1卡一卡二卡三新区| 999久久久免费精品国产牛牛| 999精品视频在线| 午夜欧美福利| 日本伦理黄色大片在线观看网站| 日韩专区一区| 国产视频网站在线观看| 亚洲精品中文字幕久久久久久| 日韩男人天堂| 一级女性大黄生活片免费| 韩国三级视频在线观看| 四虎影视库| 一a一级片| 91麻豆国产福利精品| 国产原创中文字幕| 精品国产亚洲人成在线| 人人干人人插| 黄色免费三级| 美国一区二区三区| 天天色成人| 亚洲精品久久玖玖玖玖| 国产伦精品一区二区三区在线观看 | 尤物视频网站在线| 成人a大片在线观看| 精品视频在线看| 黄视频网站在线观看| 亚飞与亚基在线观看| 99色吧| 可以免费在线看黄的网站| 99热视热频这里只有精品| 欧美电影免费看大全| 国产网站麻豆精品视频| 久久久久久久网| 国产一区二区精品尤物| 国产欧美精品午夜在线播放| 亚州视频一区二区| 日韩中文字幕在线播放| 午夜在线观看视频免费 成人| 黄视频网站免费看| 亚洲wwwwww| 久久精品免视看国产明星 | 毛片高清| 国产一区免费在线观看| 尤物视频网站在线| 99久久精品国产片| 精品视频在线观看一区二区三区| 日韩男人天堂| 久草免费资源| 免费一级片在线| 国产一区二区精品久久91| 欧美国产日韩久久久| 欧美激情一区二区三区视频 | 国产麻豆精品hdvideoss| 九九精品久久久久久久久| 美女免费毛片|